Цель. Исследовать аминокислотный состав спиртового экстракта из листьев брусники обыкновенной.
Материалы и методы. Качественный и количественный анализ свободных и связанных аминокислот в спиртовом экстракте из листьев брусники обыкновенной проводили с помощью высоко эффективного жидкостного хроматографа фирмы Agilent Technologies (модель 1100).
Результаты. В результате исследования аминокислотного состава спиртового экстракта из листьев брусники обыкновенной было установлено 16 аминокислот и определены их количественное содержание. Было исследовано аминокислотный состав спиртового экстракта с листья брусники обыкновенной, доминирующими соединениями являются метионин, лейцин, изолейцин, валин и аргинин. Содержание свободных аминокислот составляет 26,98% от суммы всех аминокислот, а содержание связанных — 73,02%. Большинство аминокислот в исследуемом экстракте находится в связном состоянии, поэтому они будут влиять на растворимость, биодоступнисть и общий фармакотерапевтический эффект экстракта.
Ключевые слова: Вересковые, брусника обыкновенная, листья, спиртовой экстракт, аминокислота.
Введение. В традиционной и официальной медицине используют как высоко эффективное средство для лечения болезней почек и мочевыводящих путей отвар из листьев брусники. Но эта лекарственная форма имеет ряд недостатков: трудности в приготовление, отсутствие стандартизации, невозможность длительного хранение, использования лекарственного растительного сырья. Поэтому создание нового стандартизированного лекарственного средства на основе биологически активных веществ листьев брусники обыкновенной является актуальным. Ранее мы сообщали о качественном и количественном химическое определение в письме и экстрактах из листьев брусники некоторых классов БАР: простых фенолов, производных гидроксикоричные кислоты, флавоноидов, полифенольных соединений, летучих веществ, органических кислот. Продолжая исследования БАР листья брусники обыкновенной и продуктов их переработки, мы обратили внимание на то, что аминокислотный состав почти не изучен. Поскольку аминокислоты могут образовывать соли и комплексные соединения с фенольными веществами их качественный состав и количественное содержание будет влиять на растворимость, биодоступность и общий фармакотерапевтических эффект экстракта, поэтому целесообразно изучить их состав в спиртовом экстракте из листьев брусники обыкновенной.
Цель. Изучить аминокислотный состав спиртового экстракта из листьев брусники обычной.
Материалы и методы. Объектом нашего исследования был жидкий экстракт из листьев брусники обыкновенной, полученный экстракцией 50% спиртом том. Полученный экстракт отвечал требованиям общей монографии ГФУ «Экстракты» и был отнесен к жидких экстрактов. Качественный и количественный анализ свободных и связанных аминокислот в экстракте из листьев брусники обыкновенной проводили с помощью высокоэффективного жидкостного хроматографа фирмы Agilent Technologies (модель 1100), укомплектованным проточным вакуумним дегазатором G1379А, 4-х канальным насосом градиента низкого давления G13111А, автоматическим инжектором G1313А, термостатом колонок G13116А, диодноматричним детектором G1316A. Для проведения анализа была использована хроматографическая колонка размером 4,6 × 50мм, заполненная октадецилсилильним сорбентом, 1,8мкм, «ZORBAX — XDB — C18». Пробоподготовка для изучения состава свободных аминокислот. В Виал (А) на 10 мл добавляли 0,3 мл экстракта. Затем в Виал приливали 3 мл 0,1N водного раствора соляной кислоты, содержащий 0,2% β-меркаптоэтанол. Виал герметично закрывали и поместили на 2:00 в ультразвуковую баню при температуре 50 ° С. Пробоподготовка для изучения общего содержания аминокислот. В Виал (В) добавляется 0,20мл экстракта. Затем в Виал приливали 3 мл 6N водного раствора соляной кислоты содержащий 0,4% β-меркаптоэтанол. Виал герметично закрывали и выдерживали 24 ч при температуре 110 ° С. Виал с образцами центрифуговали и фильтровали. Отбирали в реакционную 2 мл Виале фильтраты 100 мкл с Виале А и 20 мкл с Виале В и помещали в вакуумный эксикатор при температуре 40 45ºС и давлении 1,5 мм рт.ст. до полного удаления соляной кислоты. Затем в Виал для анализа последовательно добавляли автоматическим дозатором — 200 мкл 0,8 М боратного буфера рН 9,0, 200 мкл 20 мМ раствора 9-флуоренилметоксикарбонил хлорида в ацетонитриле, после 10 минутной выдержки в реакционную Виале добавляли 20 мкл 150 мМ раствора амантадина гидрохлорида в 50% водном ацетонитриле. Для проведения анализа устанавливали такой режим хроматографирования: рабо чей давление элюента 220-275 кПа; температура термостата колонки 50 ° С; объем пробы 2 мкл. Параметры детектирования установлены следующие: масштаб измерений 1,0; время сканирования 0,5 сек .; длина волны детектирования 265 нм. Идентификацию аминокислот проводили по времени удерживания стандартов. Рас чет содержания связанных аминокислот проводится путем вычитания содержания свободных аминокислот из их общего содержания. Однако такие аминокислоты как аспарагин и глутамин в процессе кислотного гидролиза почти количественно делятся на аспарагиновую и глутаминовая кислоты соответственно. В тех же условиях цистин, может частично или полностью распадается на цистеин и цистеиновых кислоту. Таким образом, расчет содержания связанных аминокислот: аспарагина и аспарагиновой к-ты, глутамина и глутаминовой кислоты удобно делать по их сумме соответственно. Расчет содержания связанных аминокислот цистина и цистеина воз на проводить также по их сумме, но с учетом того, что 1 молекула цистина распадается на 1 молекулу цистеина и 1 молекулу цистеиновых кислоты.
Результаты. В результате исследования аминокислотного состава спиртового экстракта из листьев брусники обыкновенной было установлено 16 аминокислот, 14 из которых Виль ни и 15 связанных аминокислот, семь из которых являются незаменимыми — треонин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, лизин и аргинин. Содержание свободных аминокислот составляет 26,98% от суммы всех аминокислот, а содержание связанных — 73,02%. Выводы. Исследована аминокислотный состав спиртового экстракта из листьев брусники обыкновенной, доминирующими соединениями являются метионин, лейцин, изолейцин, валин и аргинин. Большинство аминокислот в экстракте из листьев брусники обычной находится в связном состоянии, поэтому они будут влиять на растворимость, биодоступность и общий фармакотерапевтических эффект экстракта, нужно учитывать в технологическом процессе и при его стандартизации.
