Патогенез MALT-лимфомы

Ранние MALT-лимфомы обычно являются зависимыми от H. pylori и могут лечиться путем уничтожения бактерий с помощью антибактериальной терапии. Напротив, хромосомные транслокации, обеспечивающие автономный рост, могут возникать по мере развития лимфомы и могут сделать их независимыми от сигналов окружающей среды. Таким образом, механизмы, способствующие пролиферации опухолевых клеток, вероятно, весьма различны в ранних и поздних желудочных MALT лимфомах и поэтому обсуждаются отдельно.

Патогенез ранней, Helicobacter pylori-зависимой MALT лимфомы: роль Т-клеточных комумулирующих сигналов

есколько доказательств свидетельствуют о том, что «ранние» MALT лимфомы не растут автономно, но требуют активации активации и пролиферации клеток Т-хелпера. Многочисленные исследования показали, что опухолевые инфильтрационные Т-клетки обильны в массе MALT лимфомы (Knörr et al., 1999; Müller et al., 2005). Обнаружены как CD4 +, так и CD8 + Т-клетки с типичным соотношением приблизительно 4: 1. Проточный цитометрический и иммуногистохимический анализ биопсий человека, а также материала от экспериментально инфицированных мышей также показал, что инфильтрирующие Т-клетки активируются и экспрессируют активационный маркер CD69 (Knörr et al., 1999; Müller et al., 2005). Антигенспецифическая активация инфильтрирующих Т-клеток также демонстрируется их экспрессией CD40-лиганда, поверхностного маркера, который опосредует взаимодействие T- / B-клеток через CD40 на поверхности B-клеток (Knörr et al., 1999). Интенсивные опухоли Т-клетки в MALT лимфомах человека и MALT-лимфомальные поражения у мышей также экспрессируют маркер иммунокомпетентности CD28 (Knörr et al., 1999; Müller et al., 2005), другую поверхностную молекулу Т-клеток, которая взаимодействует с B7 Связанный с поверхностным белком CD80 на антигенпредставляющих клетках и передает костимулирующие сигналы, необходимые для полной активации Т-клеток при контакте с антигеном. Эти наблюдения повысили вероятность того, что H. pylori-специфические, активированные, инфильтрационные опухоли Т-клетки могут обеспечить сигналы роста к опухолевым В-клеткам.

Действительно, несколько исследований in vitro с использованием культур эксплантированных, несортированных опухолевых клеток показали, что их можно поддерживать в живых и индуцировать размножение путем добавления нагретого экстракт H.pylori (Hussell et al., 1993a, 1996). Истощение Т-клеток из культур отменяет пролиферацию, предполагая, что H. pylori-специфические Т-клетки играют важную роль в стимулировании пролиферации опухолевых клеток (Hussell et al., 1996). Интересно, что лигирование рецептора CD40 с помощью агонистического антитела может заменять Т-клетки в этом сценарии, предполагая, что для роста опухоли требуется прямое взаимодействие T- и B-клеток через CD40 (Greiner et al., 1997). Эта система культивирования дополнительно продемонстрировала, что цитокины, полученные из Т-клеток, типичные для Th2-подмножества, играют важную роль в пролиферации В-клеток, поскольку добавление IL-4 и IL-10, но не добавление Th1-цитокинов IFN-g или IL -2, усиливает эффект лигирования CD40 на выживаемость и пролиферацию опухолевых клеток (Greiner et al., 1997). Действительно, MALT лимфомы у людей и опухоли MALT-лимфомы у мышей, как было обнаружено, выражают высокие уровни Th2-цитокинов in vivo (Knörr et al., 1999; Müller et al., 2005), предоставляя дальнейшую поддержку роли Ответного ответа Th2 в MALT лимфомагенезе.

Интересно отметить в этом контексте, что только штаммы мыши с генетической предрасположенностью к поляризации Th2, такие как BALB / c, развивают MALT лимфомы при персистирующей экспериментальной инфекции видами Helicobacter. Штаммы с расстройством Th1, такие как C57 / Bl6, развивают связанные с Helicobacter патологиями в соответствии с требованием для Th1-предвзятых ответов Т-клеток, таких как хронический активный гастрит, изъязвление желудка и аденокарцинома желудка, но защищены от MALT лимфомы. Таким образом, Th2-поляризованные Т-клетки переводят специфичные к H. pylori сигналы в сигналы роста для ранних MALT лимфомы, которые сами по себе не являются специфичными для Helicobacter.

Специфичность MALT-лимфомы-продуцируующей иммуноглобулин

Клетки MALT-лимфомы переносят перегруппированные и соматически мутированные Ig-гены, подразумевая, что они получены из В-клеток с активированной антигеном. Коэффициенты замены против молчаливых мутаций в каркасных областях генов IgV значительно <1,5, что означает, что, несмотря на высокие частоты мутаций, селективные силы сохраняют рецептор В-клеток в MALT-MALT-лимфомах. Сообщалось о внутриклональных вариациях, вызванных текущими соматическими мутациями и / или замене части переменного тяжелого сегмента (рецепторная ревизия) (Du et al., 1996a, 1996b; Qin et al., 1997; Thiede et al., 1998). Поскольку клетки MALT-лимфомы экспрессируют функциональный Ig, их специфичность представляет большой интерес. Несколько неожиданно, многократные исследования показали, что опухоль Ig (который обычно генерируется гибридомной технологией) последовательно не распознает антиген H.pylori в Вестерн-блотах или в областях, подверженных иммуногистохимическому анализу. Напротив, было описано связывание иммуноглобулинов опухолевых клеток с различными структурами нормальных тканей человека (фолликулярные дендритные клетки, венулы, эпителиальные клетки, соединительная ткань) (Greiner et al., 1994; Hussell et al., 1993b). В соответствии с этой наблюдаемой автореактивностью опухолевых иммуноглобулинов обнаружено преимущественное использование определенных генов семейства VH, которые, как представляется, часто участвуют в производстве аутоантител (Du et al., 1996a; Qin et al., 1995).

В недавнем исследовании, сравнивающем структуру рецепторов антигенов большой группы немодгинских лимфомы зрелого B, MALT-лимфомы были уникальными в том, что значительная доля выраженных рецепторов B-клеточного антигена с сильной CDR3-гомологией с ревматоидными факторами (RFs ) (Bende et al., 2005). RFs являются антителами против Fc-части человеческого IgG, обнаруженной у пациентов с ревматоидным артритом; RFs и IgG образуют иммунные комплексы, которые являются частью процесса заболевания различных аутоиммунных заболеваний. Гомология RF-CDR3 иммуноглобулинов MALT-лимфомы без исключения включала остатки, кодированные N-областью в гипермутированных IgVH-генах, что указывает на то, что они были строго выбраны для реактивности с авто-IgG. Используя 10 антител, полученных из MALT-лимфомы, в исследованиях связывания in vitro было показано, что многие антитела с гомологией RF-CDR3 действительно обладают сильной РЧ-активностью (рис. 4.7A) (Bende et al., 2005). Ни одна из MALT-лимфомы с транслокацией (11; 18) не обладает гомологией RF-CDR3 или связыванием IgG in vitro, подтверждая, что MALT-лимфомы, несущие t (11; 18), не зависят от BCR-опосредованной активации NF-kB для выживания и пролиферации ,

Недавнее исследование поставило под сомнение общую применимость аутоиммунной гипотезы (Lenze et al., 2006). Из семи анализируемых одноцепочечных антител, клонированных из MALT-лимфомы, только один реагировал с аутоантигеном, специфичным для плазменной клетки белком Ufc1 (рис. 4.7B и C). Другие не проявляли реактивности в экранах с исчерпывающей экспрессией и библиотеками пептидов. В более крупных исследованиях еще не видно, какая доля MALT-лимфомы экспрессирует аутореактивные антитела и какие дополнительные (авто) -антигены могут быть идентифицированы.

Патогенез поздней, Helicobacter pylori-независимой MALT-лимфомы: влияние хромосомных транслокаций

Неходжкинские лимфомы имеют характерные хромосомные изменения, которые обычно специфичны для подтипа. Наиболее известным является t (14; 18) (q32; q21), что приводит к избыточной экспрессии Bcl-2 в фолликулярной лимфоме. В MALT-лимфоме выявлены три хромосомные транслокации, которые влияют на различные гены и происходят с различными частотами в определенных анатомических сайтах. Следует отметить, что все три транслокации влияют на сигнальный путь NF-kB, который в В-клетках регулирует антигензависимую активацию, пролиферацию, выживание и индукцию эффекторных функций. Конечным результатом всех трех транслокаций является повышенная пролиферация и ингибирование апоптоза, тем самым давая преимущество роста затронутым клеткам.

Транслокация t (11; 18) (q21; q21) сливает ген ингибитора апоптоза 2 (API2) на хромосоме 11q21 с геном MALT1 на хромосоме 18q21, в результате чего образуется новый химерный белок API2-MALT1 (рисунок 4.8A) (Dierlamm et Al., 1999). Это наиболее часто наблюдаемая хромосомная транслокация в MALT-MALT-лимфомах и обычно диагностируется с помощью флуоресценции in situ гибридизации (рис. 4.8B) или обратной транскриптазы (RT) -PCR. Эта транслокация особенно распространена в MALT-лимфомах желудка и легких MALT и почти никогда не встречается в MALT-MALT-лимфомах других анатомических сайтов. Зарегистрированные показатели варьируются от 24% до 48% желудочной MALT-лимфомы, в зависимости от исследования. Лимфомы с этой транслокацией обычно не реагируют на эрадикационную терапию H.pylori и, скорее всего, распространяются на локальные лимфатические узлы или отдаленные участки (Liu et al., 2001a, 2001b). Однако t (11; 18) (q21; q21) -положительные MALT-лимфомы не связаны с полноценной трансформацией и генетически стабильны, то есть они редко содержат дополнительные клональные аберрации (рис. 4.9) (Starostik et al., 2002). Напротив, t (11; 18) (q21; q21) -негативные опухоли часто показывают трисомию хромосом 3, 12 и 18, а также другие аберрации (рис. 4.9). Слитый белок API2-MALT1 содержит N-концевую область API2, ингибитор каспазы, с тремя последовательными доменами BIR (бакуловирус IAP-повторов), а также каспазоподобный домен С-конца MALT1. Полноразмерный белок MALT1 является важным компонентом антиген-рецептор-зависимой активации NF-kB в лимфоцитах. Считается, что слитый белок выводит свои онкогенные свойства посредством олигомеризации через его BIR-домены (McAllister-Lucas et al., 2001).

Транслокация t (1; 14) (p22; q32) также встречается в продвинутых и эрадикационно-резистентных MALT-лимфомах (Ye et al., 2003). Он затрагивает только около 5% всех MALT-лимфомы. Транслокация связывает ген BCL10 с локусом Ig, тем самым вызывая экспрессию Bcl-10 под контролем сильного гена-энхансера тяжелой цепи Ig (Willis et al., 1999; Zhang et al., 1999). Это приводит к сверхэкспрессии Bcl-10 и ядерной локализации. Исследования у мышей с нокаутом BCL10 показали, что белок необходим для развития и функционирования лимфоцитов, где он является частью антиген-рецепторного сигнального пути, активирующего NF-kB (Ruland et al., 2001; Xue et al., 2003). Нокаутные мыши заметно иммунодефицитные из-за дефектной активации NF-kB. Напротив, мыши, которые экспрессируют трансгенный Bcl-10 под контролем энхансера IgH, характеризуются расширением селезеночной маргинальной зоны в соответствии с ролью Bcl-10 в регуляции пролиферации B-клеток маргинальной зоны (Morris et al. 2001).

Транслокация t (14; 18) (q32; q21) сопоставляет ген MALT1 с энхансером тяжелой цепи Ig, тем самым вызывая его сверхэкспрессию (Sanchez-Izquierdo et al., 2003; Streubel et al., 2003). Эта транслокация затрагивает приблизительно 20% MALT-лимфомы и чаще встречается в MALT-лимфомах не-GI MALT. В клетках лимфомы, укрывающих t (14; 18) (q32; q21), MALT1 и Bcl-10 сверхэкспрессируются в цитоплазме (Sanchez-Izquierdo et al., 2003).

Исследования у нокаутных мышей нашли синергические роли для Bcl-10 и MALT1 в активации NF-kB после сшивания антиген-рецептора в Т-клетках, и, вероятно, подобные механизмы существуют в В-клетках. Согласно этой модели, адаптер CARD11, расположенный на липид-плот, образует тройной комплекс с Bcl-10 и MALT1 при распознавании антигена рецептора Т-клеток. Это взаимодействие индуцирует олигомеризацию MALT1, который, в свою очередь, может связывать и индуцировать олигомеризацию и активацию связанного с TNF рецептора фактора 6 (TRAF6). Активированный TRAF6 взаимодействует с ubiquitin-конъюгирующим ферментом (E2) и опосредует полиубиквитилирование NEMO / IKKg. Multiubiquitylated NEMO активирует IKKs a и b, которые фосфорилируют и вызывают деградацию IkB и высвобождение NF-kB.

Если Bcl-10 сверхэкспрессируется в B-клетках в результате транслокации t (1; 14) (p22; q32), он олигомеризуется через свой домен CARD и сочетает сигнальный путь путем запуска олигомеризации MALT1 антиген-независимым образом. MALT1, напротив, не может олигомеризоваться сам по себе, поскольку в нем отсутствуют требуемые структурные домены. В клетках, которые поддерживают транслокацию t (14; 18) (q32; q21) (и, следовательно, сверхэкспрессируют MALT1), в цитоплазме наблюдаются высокие уровни как MALT1, так и Bcl-10 (Sanchez-Izquierdo et al., 2003), что указывает на то, что MALT1 может связываться с Bcl-10 и стабилизировать его. Это взаимодействие может активировать NF-kB в отсутствие связывания антигена. В случае транслокации t (11; 18) (q21; q21), продуцирующей слитый белок API2-MALT1, предполагается, что BIR-домены, внесенные N-концами API2, индуцируют олигомеризацию слитого белка и устраняют потребность в Bcl -10 (McAllisterLucas et al., 2001). В дополнение к своей (нормальной) цитоплазматической локализации Bcl-10 обнаруживается в ядрах t (1; 14) (p22; q32) -положительных и t (11; 18) (q21; q21) -положительных клетках MALT-лимфомы, Но онкогенный потенциал ядерного Bcl-10 остается неясным.

Молекулярные механизмы трансформации высокого ранга

Низкосортная MALT-лимфома MALT может трансформироваться в (полноценную) диффузную большую В-клеточную лимфому (DLBCL), которая патогенетически отличается от ее узлового аналога несколькими способами. Например, перегруппировка BCL2 часто встречается в узловых DLBCL, но отсутствует в желудочном DLBCL (Cogliatti et al., 2000). И наоборот, высокая частота перегруппировок MYC наблюдается в желудочном DLBCL, тогда как они встречаются редко в узловой аналогии. Неясно, происходят ли все DLBCL желудка из низкосортной MALT-лимфомы или существуют ли другие патогенетические механизмы. Наиболее изученным фактором, который, как считается, связан с полноценной трансформацией, является Bcl-6. Bcl-6 обычно функционирует в качестве транскрипционного переключателя, контролирующего образование зародышевого центра, и его регулируют по мере того, как лимфоциты в GC дифференцируются в память B или плазматические клетки. В результате Bcl-6 высоко экспрессируется в нормальных GC-клетках, а также в новообразованиях, полученных из GC-клеток, таких как фолликулярная MALT-лимфома. Напротив, низкосортная MALT-лимфома MALT обычно отрицательна для Bcl-6, а также другого GC-маркера CD10, что соответствует его выведению из B-клеток маргинальной зоны. Таким образом, иммуноокрашивание для Bcl-6 и CD10 играет важную роль в дифференциальной диагностике злокачественных новообразований B-клеток с различными нормальными клеточными аналогами (Dogan et al., 2000).

Высококачественные желудочные (и неглазные) DLBCL гетерогенны в терминах экспрессии Bcl-6. Действительно, иммуноокрашивание для Bcl-6, а также CD10 и MUM1 может быть использовано для классификации DLBCL в подгруппах GC B-cell (GCB) и не GCB с прогностическим значением (Chen et al., 2006). Случаи с высокой экспрессией Bcl-6 обычно имеют более благоприятный прогноз. Выражение Bcl-6 может быть отменено по меньшей мере тремя различными механизмами. С одной стороны, мутации в двух «связывающих мотивах BCL6» BSE1A и BSE1B могут препятствовать связыванию Bcl-6 с его собственным промотором, нарушая тем самым его отрицательную авторегуляцию. Эти мутации всегда связаны с высокой экспрессией Bcl-6 и встречаются примерно в 25% случаев DLBCL (Chen et al., 2006). С другой стороны, хромосомные транслокации с участием гена BCL6 сопоставляют свою 5′-регуляторную область с промоторной областью Ig-гена; Также были обнаружены слияния с другими конститутивно экспрессируемыми генами, не являющимися Ig. Приблизительно 40% DLBCL несут транслокации BCL6, которые также обычно связаны с высокой экспрессией продукта гена (Chen et al., 2006). Ни сегрегационные мутации, ни транслокации с участием Bcl-6 не обнаруживаются на высокой частоте в низкосортных MALT-MALT-лимфомах. Поэтому было высказано предположение о том, что трансформация с низким и высоким содержанием происходит посредством мутаций или транслокаций гена BCL6. Транслокации, включающие Ig-гены, в частности, могут возникать во время ошибочного переключения класса изотипа Ig, которое, как было показано, происходит в пропорции лимфомы желудка MALT. Наличие многих реакционноспособных фолликулов в MALT-лимфоме может обеспечить установку для обоих типов генетических изменений BCL6, что приводит к полноценной трансформации.

Третий механизм дерегулирования Bcl-6 включает усиление области 3q26.2-3q27. Эта область на хромосоме 3 содержит гены, кодирующие Bcl-6 и каталитическую субъединицу фосфатидилинозитол-3-киназы, которая участвует в качестве онкогена при раке яичников. Было показано, что в исследовании, сравнивающем генетические аномалии в лимфоме желудка MALT и желудочном DLBCL с помощью микросателлитного скрининга, было показано, что амплификация области 3q26,2-3q27 является наиболее частым аллельным дисбалансом, влияющим на оба субъекта заболевания (приблизительно 20%) (Starostik et al. 2002). Этот и несколько других аллельных дисбалансов разделялись t (11; 18) (q21; q21) -негативными MALT-лимфомами MALT и желудочным DLBCL (рис. 4.11), тогда как t (11; 18) (q21; q21) -положительные случаи MALT-лимфомы были генетически устойчивы, т. Е. Не приобретают дополнительных генетических аберраций (рис. 4.9, 11А). В целом частота аберраций была значительно ниже в случаях MALT-лимфомы по сравнению с DLBCL. Отдельная подгруппа аллельных дисбалансов уникальна для случаев DLBCL и никогда не обнаруживается ни в одном из случаев MALT-лимфомы. Гены, затронутые этими аберрациями, являются хорошими дополнительными кандидатами на роль в переходе с низким до высокого уровня. Среди аберраций в этой группе LOH наблюдается в областях 5q21 (локус гена APC), 9p21 (INK4A / ARF), 13q14 (RB) и 17p13 (p53) (Starostik et al., 2002). Действительно, полная инактивация супрессора опухоли р53 путем мутации или делеции наблюдалась в DLBCL также в независимых исследованиях (например, Du et al., 1995), так как имеет инактивацию гена INK4A, кодирующего ингибитор циклинзависимой киназы, и отрицательный регулятор Клеточный цикл (Neumeister et al., 1997).

Исходя из сходства и различий в аллельных дисбалансах, обнаруженных в обеих группах опухолей, было предложено, чтобы желудочные лимфомы развивались вдоль двух различных путей (Starostik et al., 2002). Одна группа опухолей развивается по пути, определяемому дисрегуляцией генов API2 и MALT1, вызванных t (11; 18). Эти опухоли не накапливают достаточное количество вторичных генетических аберраций, чтобы трансформироваться в DLBCL и оставаться на стадии MALT-лимфомы. Напротив, MALT-лимфомы, характеризующиеся отсутствием t (11; 18) и повышенным накоплением различных генетических аномалий, чаще всего амплификация 3q26,2-27, могут быть источником опухолей, которые в конечном итоге превращаются в полноценный DLBCL ( Starostik et al., 2002). Основываясь на дополнительном нахождении, что многие DLBCL не содержат каких-либо общих аномалий, он далее предположил, что DLBCL можно разделить на две группы: одну, которая проистекает из низкосортной копии (характеризующейся 3q27 и другими общими аберрациями) и Который развивает de novo (Starostik et al., 2002).